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病原病毒嚴(yán)重危害動(dòng)植物以及人類健康,必須及時(shí)準(zhǔn)確地檢測(cè)病毒。然而,病毒非?!敖苹保瑫r(shí)常發(fā)生變異,逃過人類檢測(cè),繼續(xù)肆意生長(zhǎng)。12日,記者從山東農(nóng)業(yè)大學(xué)獲悉,該校李向東教授團(tuán)隊(duì)近日制備了一種單克隆抗體,被稱為“雞尾酒”,意為可以像雞尾酒一樣將兩個(gè)單克隆抗體混合起來,讓所有攜帶特異性目標(biāo)病毒的檢測(cè)對(duì)象無一遺漏。
6月《植物生物技術(shù)雜志》在線發(fā)表上述成果。該成果可應(yīng)用于動(dòng)植物病毒所有分離物的檢測(cè),比如對(duì)新冠病毒的檢測(cè),可杜絕漏檢現(xiàn)象。
基于抗體抗原識(shí)別的血清學(xué)方法在病原病毒檢測(cè)中至關(guān)重要,而抗體識(shí)別的是病毒的抗原決定簇。人們采用的抗體分為多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體含有多個(gè)抗原決定簇的抗體,而不同病毒可能有相同或相似的抗原決定簇,因而多克隆抗體可能會(huì)與非靶標(biāo)病毒發(fā)生交叉反應(yīng),很容易出現(xiàn)錯(cuò)檢。比如曾經(jīng)出現(xiàn)過健康人被告知感染某種病毒的誤診。
單克隆抗體就是單一的B細(xì)胞(漿細(xì)胞),能夠分泌出相對(duì)高度均一且針對(duì)某個(gè)特定抗原表型的抗體,并且為人工培養(yǎng)。單克隆抗體只是針對(duì)某一個(gè)抗原決定簇,因而特異性更高。但因?yàn)椴《居卸鄠€(gè)抗原決定簇,而有些單克隆抗體只能檢測(cè)到部分病毒分離物,就導(dǎo)致了漏檢現(xiàn)象發(fā)生。
馬鈴薯Y病毒是馬鈴薯Y病毒屬的代表種,主要侵染馬鈴薯、煙草、辣椒、番茄等茄科作物,嚴(yán)重影響作物產(chǎn)量和品質(zhì)。之前研究表明,利用國(guó)際上廣泛使用的馬鈴薯Y病毒單克隆抗體檢測(cè)馬鈴薯Y病毒分離物,最高時(shí)可能出現(xiàn)48.57%漏檢現(xiàn)象。因?yàn)轳R鈴薯主要靠種薯進(jìn)行繁殖,漏檢越多,會(huì)讓許多帶病種薯或種苗流向田間和市場(chǎng),導(dǎo)致病毒病嚴(yán)重發(fā)生。
李向東教授團(tuán)隊(duì)制備了54個(gè)馬鈴薯Y病毒的單克隆抗體,通過刪除突變以及丙氨酸掃描等分析明確了這些單克隆抗體所識(shí)別的抗原決定簇,篩選到了4個(gè)單克隆抗體,它們所識(shí)別的抗原決定簇與國(guó)際上廣泛使用的馬鈴薯Y病毒單克隆抗體不同,而且在馬鈴薯Y病毒衣殼蛋白中相對(duì)保守,其中3個(gè)單克隆抗體能檢測(cè)到更多的馬鈴薯Y病毒分離物。
他們通過科學(xué)組合識(shí)別不同抗原決定簇的單克隆抗體,得到了類似雞尾酒的兩種單克隆抗體的組合,它們可檢測(cè)的馬鈴薯Y病毒分離物有互補(bǔ)性,能檢測(cè)所有已知的1885個(gè)PVY分離物,實(shí)現(xiàn)所有馬鈴薯Y病毒分離物的全覆蓋檢測(cè)。對(duì)于新出現(xiàn)的株系,也可根據(jù)其衣殼蛋白氨基酸序列來判斷是否能用這個(gè)組合來檢測(cè)。
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